رسالة ماجستير تبحث في الكشف المبكر عن سرطان الثدي من خلال دراسة التعبير الجيني لجزيئات الـ miR-٣٢٨ و miR-٣٧٠

ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) رسالة الماجستير الموسومة ” دراسة تعبير MicroRNA  الدقيق في مرضى أورام الثدي العراقيين” للطالبة (مريم جاسم حسن البياتي) التي انجزت تحت باشراف التدريسية في القسم (أ.م.د. وفاء صبري ماهود) .

ونظراً لزيادة حالات الإصابة بسرطان الثدي في السنوات الأخيرة وقلة وجود مؤشرات حيوية للكشف المبكر عن هذه الأورام الحميدة والخبيثة فقد هدفت هذه الدراسة الى :

1. دراسة التعبير الجيني لجزيئات الـ miR-٣٢٨ و miR-٣٧٠ وعلاقتها بالأورام الحميدة، والأورام الخبيثة (سرطان الثدي) وكذلك علاقتها بالخصائص السريرية للمرضى المصابين.

2. دراسة علاقة miR-٣٢٨ و miR-٣٧٠ مع بعضها البعض في أورام الثدي (الحميدة والخبيثة) .

3. إمكانية استعمال التعبير الجيني لـ miR-٣٢٨ و miR-٣٧٠ كمؤشرات حيوية للكشف عن أورام الثدي.

و تضمنت هذه الدراسة جمع  ٥٠ عينة نسيجية Fresh tissue من أورام الثدي، و ١٠ عينات من الأنسجة الطبيعية كمجموعة سيطرة،  تراوحت أعمارهم بين ٧٧-١٩  عاماً للمصابين بأورام الثدي الحميد و الخبيث إذ تضمنت الدراسة ٢٥ عينة نسيجية من مرضى سرطان الثدي وكانت ٢٠ إصابة منها سرطانات الغازية Invasive carcinomas ، و ٣ من سرطان الأقنية  Ductal carcinomas ، و ٢ من سرطان الفصي  carcinomas Lobular  , و٢٥ عينة نسيجية من المرضى المصابين بأورام حميدة . تم استخلاص الأحماض النووية الرايبوزية الكلية بما فيها جزيئات miRNA   الدقيقة من العينات النسيجية  وتحويله الى DNA  المتمم  cDNA و بعدها تم قياس مستوى التعبير الجيني بتقنية تفاعل (qRT-PCR) .

       أظهرت النتائج أن هناك فرقاً معنوياً في التعبير عن miR-٣٢٨  في الأورام الحميدة مقارنة بمجموعة السيطرة اعتماداً على موقع الورم  (جهة اليمين (P=٠.٠٥١. وجود فروق معنوية في التعبير عن miR-٣٢٨ بين الأورام الخبيثة  ومجموعة السيطرة  (P=٠.٠٣٣) في الأعمار الأقل من  ٥٠سنة  . كما وجد ارتباط معنوي في مستوى التعبير عن miR-٣٢٨  في الأورام الخبيثة بين السرطانات الفصية carcinomas Lobular (P=٠.٠١٤)  ومجموعة السيطرة ، كما وجد ارتباط معنوي في مستوى التعبير عن miR-٣٢٨  بين مجموعة السرطانات القنوية Ductal carcinomas ، و السرطانات الفصية carcinomas Lobular (P=٠.٠٣٣)، وفرق معنوي بين مجموعة السرطانات الفصية carcinomas Lobular والسرطانات الغازية Invasive carcinomas (P=٠.٠٤٧). ولا توجد فروق معنوية اعتماداً على مرحلة الورم Grade.

   وقد لوحظ وجود فروقات معنوية فيما يخص مستوى التعبير  الجيني لجزيئة  miR-٣٧٠ بالنسبة للأعمار الأقل من ٥٠ سنة (P=٠.٠٤٧) و(P=٠.٠٥) في الأورام الحميدة والخبيثة على التوالي مقارنة بمجموعة السيطرة ، اشارت النتائج الى  ارتباط معنوي اعتماداً على الموقع في جهة اليسار (P=٠.٠٥) في الأورام الخبيثة مقارنةً بمجموعة السيطرة ولم تظهر اي فروقات معنوية اعتماداً على نوع الورم  Tumor type, ونوع التمايزDifferentiations ، و درجة الورم Grade  في هذا الجين. اشارت النتائج اخيراً الى وجود ارتباط معنوي متوسط طردي وثيق  بين  مستوى التعبيرين  miR-٣٢٨، و miR-٣٧٠ والخصائص السريرية مثل نوع الورم والموقع (P=٠.٠١٤)  و (P=٠.٠٣٤) على التوالي.  ربما تشير نتائج هذه الدراسة الى امكانية استعمال التغير في مستوى التعبير الجيني لجزيئات miR-٣٢٨   و miR-٣٧٠ كمؤشرات حيوية لتشخيص الإصابة بأورام الثدي بنوعيها .

واوصت الدراسة بالتوصيات التالية :

-١هناك حاجة لإجراء المزيد من الدراسات حول جزيئات  miR-٣٢٨ و miR-٣٧٠ على اعداد كبيرة من مرضى أورام الثدي لتأكيد النتائج المستحصلة في هذه الدراسة ودعمها.

٢- مقارنة التعبير عن miR-٣٢٨ و miR-٣٧٠ microRNAs في سرطان الثدي وأنواع أخرى من مرضى السرطان في مناطق مختلفة في العراق.

 -٣اجراء دراسات حول استعمال miR-٣٢٨  و  miR-٣٧٠ كعامل حيوي للتشخيص المبكر والمتابعة بعد الجراحة وامكانية استهدافه لغرض العلاج .

٤- اجراء المزيد من الدراسات لتحديد التعبير الجيني لجزيئات اخرى من  microRNA واختيار الجزيئات الاكفأ في تشخيص أورام الثدي.  

و حصلت الطالبة على تقدير (امتياز) بعد مناقشتها في محتويات رسالتها وتفاصيل بحثها من قبل لجنة المناقشة المدرجة اسمائهم فيما يلي :

1. أ.د. حميد مجيد جاسم (رئيسا)

2. أ.م.د. حازمة موسى خليل (عضوا)

3. أ.م.د. محمد مهدي جواد (عضوا)

4. أ.م.د. وفاء صبري ماهود (عضوا ومشرفا)

---

MSc .Thesis on early detection of breast cancer by studying the gene expression of the miR-٣٢٨ and miR-٣٧٠ molecules

The student Mariam Jasim Hassan Al-Baiati discussed her MSc thesis entitled (study MicoRNA in Patients with Iraqi breast tumors)supervised by Asst.prof.Dr.Wafaa Sabri Mahood

The discussion committee

Prof.Dr.Hameed Majeed Jasim   haed

Asst.prof.Dr.Hazima Moosa Khalil   member

Asst.prof.Dr.Mohammed Mahdi Jawad   member

Asst.prof.Dr.Wafaa Sabri Mahood   supervisor member

The Abstract

  breast cancer is still one of the largest threats to women’s health, and so far there are no proven and appropriate methods for early diagnosis of breast cancer, which accounts for nearly a quarter of the cancer in Iraq.

micro Ribonucleic Acid (micro RNA) are a promising bio marker for cancer detection because micro RNA is a constant and is able for extraction from a variety of clinical tissue samples (frozen or preserved in paraffin wax) as well as body fluids (blood, urine and saliva). More recently, there have been more studies on the use of microRNA  in research on all types of cancer and there have been promising results in this field by researching    through the gene expression of these molecules and the extent of changes in the level of gene expression increase or decrease and is related to the initiated growth , development of tumors and all the clinical characteristics of those affected by these diseases, micro RNA-٣٢٨  and ٣٧٠  micro RNA-٣٧٠  is one of these molecules that were used as bio markers for cancer detection by investigation of their gene expression and their relationship

with the occurrence of benign and malignant breast tumors cancerous

This study aims to identify the gene expression of miR-٣٢٨, miR-٣٧٠) as bio markers for early diagnosis of breast cancer detection

        ٥٠ Fresh tissue samples were collected from breast tumors and ١٠ samples of normal tissues were used  as a control group, the with ages rang (١٩-٧٧) years of patients with benign and malignant breast tumors, including ٢٥ tissue samples of breast cancer patients, ٢٠ of which were have Invasive carcinomas and ٣ ductal carcinomas and ٢ lobular carcinomas, ٢٥ tissue samples of patients with benign tumors. Total RNAs includingmiRNA molecules were extracted from the tissue samples and transformed into cDNA and then the level of the gene expression was measured by (qRT-PCR) technique.

       The results showed that there is significant difference in the expression of MiR-٣٢٨ in the benign tumors compered with the control group depend on mass location (right group P = ٠.٠٥١). There are significant differences in the expression of miR-٣٢٨ in malignant tumors between the control group and ages less than ٥٠ years (P = ٠.٠٣٣).There is high difference in the expression of miR-٣٢٨ in malignant tumors also between control and lobular carcinomas (p = ٠.٠١٤), difference between the ductal carcinomas group and  Lobular carcinomas (p = ٠.٠٣٣), and the high significant different  between the group  Lobular carcinomas and Invasive carcinomas (P = ٠.٠٤٧). There are no associations depending on the Grade tumor.

       Concerned the level of gene expression of the MiR-٣٧٠ molecule, it was noted that there were significant differences in the level of the gene expression MiR-٣٧٠ in ages less than ٥٠ years (P = ٠.٠٤٧) and (P = ٠.٠٥) in benign and malignant tumors respectively compared to the control group, the results refer to significant differences depending on .The  results showed that there was significant association of gene expression in the left site (P = ٠.٠٥) in malignant tumors compared to the control group depend on tumor location  but there was appear  no association depending on the type of tumor, differentiation and the tumor Grade in MiR-٣٧٠ molecule. Finally, the results indicate to that there was a very close intermediate correlation between the level of gene expressions miR-٣٢٨ and miR-٣٧٠ and the clinical characteristics such as tumor type and tumor location.  In conclusion this study indicate to that the change of gene expression level of miR-٣٢٨ and miR-٣٧٠ molecules may be can used as bio markers for diagnosis breast tumor